LRP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400638-ACT

LRP1 (Low-Density-Lipoprotein-Rezeptor‑verwandtes Protein 1) ist ein multifunktionaler endozytotischer und Signalrezeptor, der eine Vielzahl unterschiedlicher Liganden bindet, darunter Apolipoprotein‑E‑haltige Lipoproteine, α2‑Makroglobulin‑Protease‑Komplexe und mit der extrazellulären Matrix assoziierte Faktoren. Es reguliert die rezeptorvermittelte Aufnahme und den intrazellulären Transport, steuert die Clearance extrazellulärer Proteasen und koordiniert – abhängig vom Zelltyp – Signalgebung über Signalwege wie MAPK/ERK, PI3K/AKT und TGF‑β. Humanes LRP1 beeinflusst den Lipidstoffwechsel, die Zellmigration und die vaskuläre Homöostase und wurde in der Neurobiologie mit Funktionen im Amyloid‑β‑Transport und in der synaptischen Regulation in Verbindung gebracht. Eine veränderte LRP1‑Expression oder ‑Funktion ist mit kardiometabolischen Merkmalen, atherosklerosebezogenen Prozessen sowie neurodegenerativen und krebsrelevanten Mechanismen assoziiert, die u. a. Umbauprozesse der extrazellulären Matrix und Wachstumsfaktor‑Signalgebung betreffen.

LRP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.