LRG-47 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421030-LAC

Das murine Irgm1-Gen kodiert die interferoninduzierbare, immunitätsassoziierte GTPase LRG-47, einen zentralen Regulator der zellautonomen Abwehr gegen intrazelluläre Pathogene. LRG-47 unterstützt antimikrobielle Programme, indem es die Phagosomenreifung, autophagiebezogene Membrandynamiken und den intrazellulären Transport nachgeschaltet zur Interferon-Signalgebung koordiniert. Über diese Prozesse trägt es zur Immunhomöostase in Makrophagen und anderen myeloiden Zelllinien bei, beeinflusst die Entzündungsantworten und die Kontrolle von Erregern. Eine fehlregulierte Irgm1-Aktivität wurde in Mausmodellen mit einer veränderten Anfälligkeit für Infektionen und entzündlichen Krankheitsphänotypen in Verbindung gebracht, was Irgm1 für Studien zu Wirt–Pathogen-Interaktionen und Netzwerken der angeborenen Immun-Signalgebung relevant macht.

LRG-47 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Irgm1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LRG-47 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Irgm1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LRG-47-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Irgm1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.