Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (m): sc-421462

Présentation

Zbtb7a code pour LRF/Pokemon, un facteur de transcription à doigts de zinc de type BTB/POZ qui régule l’engagement de lignée, la prolifération et la survie via une liaison spécifique de séquence à l’ADN et le recrutement de complexes corépresseurs. Dans les contextes hématopoïétiques et immunitaires, il contribue à coordonner les programmes de développement des cellules B et T, influence la maturation érythroïde et module des réseaux transcriptionnels associés à la différenciation. LRF/Pokemon interfère avec des voies contrôlant les points de contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress, notamment par un antagonisme fonctionnel de la signalisation suppresseur de tumeur ARF–p53, et peut remodeler les états de la chromatine aux loci cibles. Une activité altérée de Zbtb7a a été impliquée dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et des phénotypes de différenciation anormaux dans des modèles de cancers hématologiques et solides, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la tumorigenèse et du contrôle du destin cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zbtb7a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zbtb7a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zbtb7a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRF/Pokemon.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zbtb7a pour l'étude de la signalisation de LRF/Pokemon, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zbtb7a essentiels à la fonction de LRF/Pokemon
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zbtb7a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRF/Pokemon plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LRF/Pokemon plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zbtb7a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRF/Pokemon plasmide HDR (m) et le LRF/Pokemon (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zbtb7a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zbtb7a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.