Plasmide CRISPR/Cas9 KO LPP (h): sc-406769

Présentation

LPP (lipoma‑preferred partner) code une protéine adaptatrice contenant des domaines LIM, localisée aux adhérences focales et aux jonctions cellule‑cellule, où elle couple la tension du cytosquelette à des réponses transcriptionnelles. Par ses interactions avec des protéines associées à l’actine et des plateformes de signalisation, LPP contribue à la dynamique des adhérences liées aux intégrines, à la mécanotransduction et à la régulation des programmes de migration et d’invasion cellulaires. Elle est également impliquée dans la navette nucléaire et la modulation de l’expression génique en aval des voies dépendantes de l’adhérence. Une expression altérée ou des réarrangements de LPP ont été rapportés dans divers contextes, notamment des tumeurs mésenchymateuses et la progression métastatique, ce qui soutient son intérêt comme cible pour l’étude de phénotypes oncogéniques régulés par l’adhérence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LPP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LPP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LPP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LPP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LPP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LPP pour l'étude de la signalisation de LPP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LPP essentiels à la fonction de LPP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LPP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LPP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LPP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LPP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LPP plasmide HDR (h) et le LPP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LPP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LPP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.