LPP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406769

Übersicht

LPP (lipoma‑preferred partner) kodiert ein LIM‑Domänen‑haltiges Adapterprotein, das an fokalen Adhäsionen und Zell‑Zell‑Kontakten lokalisiert ist und dort zytoskelettale Spannung mit transkriptionellen Antworten koppelt. Über Interaktionen mit aktinassoziierten Proteinen und Signalplattformen trägt LPP zur integrinvermittelten Adhäsionsdynamik, zur Mechanotransduktion sowie zur Regulation von Programmen der Zellmigration und -invasion bei. Zudem ist LPP am nukleären Shuttling und an der Modulation der Genexpression nachgeschaltet zu adhäsionsabhängigen Signalwegen beteiligt. Eine veränderte LPP‑Expression oder -Rearrangierung wurde u. a. im Kontext mesenchymaler Tumoren und metastatischer Progression beschrieben, was seinen Nutzen als Ziel zur Untersuchung adhäsionsregulierter onkogener Phänotypen unterstreicht.

Das LPP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LPP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LPP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LPP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LPP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LPP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LPP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LPP-Exone abzielen, die für die LPP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LPP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LPP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LPP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LPP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LPP HDR-Plasmid (h) und LPP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LPP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LPP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.