LPLUNC3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406344

Panoramica

BPIFB3 (LPLUNC3) è un membro secreto della famiglia contenente il fold BPI, arricchito negli epiteli mucosali, dove si ritiene contribuisca alla difesa innata a livello delle superfici delle vie aeree e del tratto aerodigestivo superiore. Le proteine di questa famiglia interagiscono con lipidi associati ai microrganismi e possono modulare l’omeostasi della barriera epiteliale influenzando la segnalazione infiammatoria e le risposte antimicrobiche. L’espressione di BPIFB3 è sensibile a stimoli ambientali e infiammatori ed è stata collegata alla regolazione dei programmi di differenziazione epiteliale e delle interazioni ospite–microbo. Alterazioni dei livelli di BPIFB3/LPLUNC3 sono state riportate in diversi stati infiammatori delle vie aeree e in patologie associate all’epitelio, a supporto della sua utilità come marcatore e nodo meccanicistico nella ricerca sulla biologia delle mucose.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LPLUNC3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BPIFB3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BPIFB3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BPIFB3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LPLUNC3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BPIFB3 per lo studio della segnalazione di LPLUNC3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BPIFB3 critici per la funzione di LPLUNC3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BPIFB3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LPLUNC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LPLUNC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BPIFB3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LPLUNC3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LPLUNC3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BPIFB3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BPIFB3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.