LPL CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421460-ACT

マウスLplはリポタンパク質リパーゼ（LPL）をコードしており、LPLは分泌型でヘパラン硫酸結合性の酵素である。LPLは循環中のカイロミクロンおよびVLDLに含まれるトリグリセリドを加水分解し、脂肪組織、心臓、骨格筋に取り込まれる脂肪酸を遊離させる。LPL活性はGPIHBP1などの内皮輸送・係留因子によって協調的に制御され、アポリポタンパク質やアンジオポエチン様タンパク質によって調節されることで、栄養状態と脂質分配が結び付けられている。脂質の取り込みと貯蔵の制御を通じて、LPLはエネルギーホメオスタシス、脂肪細胞の生物学、インスリン感受性に寄与し、その制御異常は代謝疾患モデルにおいて高トリグリセリド血症、肝脂肪化、ならびに動脈硬化関連の表現型と関連する。これらの特性により、Lplはマウス系においてリポタンパク質代謝、血管での脂質取り扱い、そして炎症に隣接する代謝経路を研究するための中心的な結節点となっている。

LPL CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Lplの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LPL CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Lpl 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLpl転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LPLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLpl遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLPL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLpl発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLPL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。