LPAAT-η Double Nickase Plasmid (h): sc-406893-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LPAAT-η Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LPAAT-η Double-Nickase-Plasmid (h) und LPAAT-η Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LPCAT4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LPAAT-η Double Nickase Plasmid (h) | sc-406893-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LPAAT-η Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406893-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LPCAT4 kodiert die Lysophosphatidylcholin-Acyltransferase 4 (LPAAT-η), ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das Membranphospholipide umgestaltet, indem es Lysophospholipide acyliert und so Phosphatidylcholin sowie verwandte Glycerophospholipide erzeugt. Über diese Aktivität im Lands-Zyklus beeinflusst LPAAT-η die Membranzusammensetzung, -krümmung und die Homöostase von Organellen, mit nachgelagerten Effekten auf den vesikulären Transport, die Dynamik von Lipidtröpfchen und stressresponsive Signalwege. Störungen der Phospholipid-Remodellierung und der Acyltransferase-Aktivität wurden mit veränderten proliferativen und inflammatorischen Signalwegen sowie metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht, wodurch LPCAT4 einen relevanten Knotenpunkt für Studien darstellt, die den Lipidstoffwechsel mit krankheitsassoziierten zellulären Phänotypen verknüpfen.
LPAAT-η Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LPCAT4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LPCAT4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LPCAT4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LPCAT4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.