LPAAT-η Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406893

Descripción general

LPCAT4 codifica la lisofosfatidilcolina aciltransferasa 4 (LPAAT-η), una aciltransferasa asociada a membrana que cataliza la reacilación de lisofosfolípidos para generar fosfatidilcolina y otros glicerofosfolípidos relacionados. Al controlar la remodelación de fosfolípidos, LPAAT-η contribuye a la composición de la membrana, la homeostasis de los orgánulos y procesos de señalización dependientes de lípidos que influyen en el tráfico vesicular y las respuestas al estrés. La actividad de LPCAT4 se cruza con el ciclo de Lands y con el metabolismo más amplio de los glicerofosfolípidos, afectando la disponibilidad de especies lipídicas que modulan la señalización de receptores y las vías inflamatorias. La remodelación desregulada de fosfolípidos se ha vinculado a fenotipos metabólicos y proliferativos, lo que convierte a LPCAT4 en una diana útil para estudiar mecanismos impulsados por lípidos relevantes para la biología del cáncer, modelos de enfermedad cardiometabólica y estados celulares asociados a la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LPAAT-η (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LPCAT4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LPCAT4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LPCAT4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LPAAT-η.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LPCAT4 para la investigación de la señalización de LPAAT-η, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LPCAT4 críticos para la función de LPAAT-η
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LPCAT4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LPAAT-η CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LPAAT-η CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LPCAT4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LPAAT-η (h) y el plásmido HDR LPAAT-η (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LPCAT4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LPCAT4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.