LPAAT-β Double Nickase Plasmid (h): sc-405045-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LPAAT-β Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LPAAT-β Double-Nickase-Plasmid (h) und LPAAT-β Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AGPAT2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LPAAT-β Double Nickase Plasmid (h) | sc-405045-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LPAAT-β Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405045-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGPAT2 kodiert die Lysophosphatidsäure-Acyltransferase-β (LPAAT-β), ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das die Acylierung von Lysophosphatidsäure zu Phosphatidsäure katalysiert – einem zentralen Zwischenprodukt der Biosynthese von Glycerophospholipiden und Triacylglycerolen. Durch die Steuerung der Verfügbarkeit von Phosphatidsäure beeinflusst LPAAT-β die Membranbiogenese, die Bildung von Lipidtröpfchen sowie Lipid-Signalknotenpunkte, die mit der Phospholipid-Remodellierung und Energiespeicherwegen verknüpft sind. Die AGPAT2-Aktivität ist eng mit der Lipidhomöostase von Adipozyten und einer übergeordneten metabolischen Regulation verbunden; Störungen dieses Signalwegs stehen in Zusammenhang mit schweren Lipodystrophie-Phänotypen und metabolischen Dysfunktionen im Kontext von Insulinresistenz. Entsprechend wird AGPAT2 häufig in Zusammenhängen wie Adipogenese, lipidischem Organellenfluss und lipidvermittelter Regulation zellulärer Stressantworten untersucht.
LPAAT-β Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AGPAT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AGPAT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AGPAT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AGPAT2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.