Plásmido CRISPR de Activación (h) Loricrin: sc-402452-ACT

El gen LOR humano codifica la loricrina, una proteína estructural muy abundante del envoltorio cornificado que contribuye a la formación de la barrera epidérmica durante la diferenciación terminal de los queratinocitos. La loricrina se entrecruza extensamente mediante transglutaminasas y se integra con otros componentes del envoltorio para reforzar el estrato córneo y mantener la resiliencia del tejido. Su expresión se coordina dentro de programas de diferenciación epidérmica que incluyen las vías de queratinización y cornificación, incluidas redes transcripcionales que regulan genes de diferenciación tardía. La expresión desregulada de LOR o un ensamblaje alterado del envoltorio cornificado se asocian con una función de barrera deficiente y se han vinculado a trastornos cutáneos hereditarios e inflamatorios, lo que lo hace relevante para estudios de homeostasis epidérmica y mecanismos de enfermedad.

Loricrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LOR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Loricrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LOR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LOR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Loricrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LOR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Loricrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Loricrin en células tumorales con expresión de LOR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.