LONP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-428748-LAC

Lonp1 codifica LONP1, una proteasi serinica ATP-dipendente della matrice mitocondriale che collega il controllo di qualità proteico alla proteostasi dell’organello. LONP1 riconosce e degrada proteine mitocondriali ossidate o mal ripiegate, supporta il turnover dei componenti della catena respiratoria e contribuisce al mantenimento del mtDNA e della funzione del ribosoma mitocondriale in condizioni di stress. Attraverso i suoi ruoli nella segnalazione della risposta mitocondriale alle proteine non ripiegate, nella fosforilazione ossidativa e nell’omeostasi redox, un’alterata attività di LONP1 è associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale che influenzano il metabolismo energetico e la tolleranza cellulare allo stress. Nei modelli murini, Lonp1 è spesso studiato in contesti in cui la proteostasi mitocondriale si intreccia con la neurodegenerazione, il rimodellamento cardiometabolico e i declini legati all’invecchiamento della funzione mitocondriale.

Le particelle di attivazione lentivirale LONP1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Lonp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LONP1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Lonp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LONP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Lonp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.