LOH12CR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-426735-KO-2

Übersicht

Borcs5 kodiert LOH12CR1, eine Komponente des BORC‑Komplexes (BLOC‑1‑related complex), der die periphere Positionierung von Lysosomen und lysosomenverwandten Organellen unterstützt, indem er sie an den mikrotubuli-basierten Transport koppelt. Über diese Funktion trägt LOH12CR1 zum endolysosomalen Transport, zur räumlichen Steuerung der Abbaukapazität sowie zu Prozessen wie Autophagie und Membranproteinumsatz bei, die von der Lysosomenverteilung abhängen. Die BORC-abhängige Dispersion von Lysosomen greift in Signalwege ein, die von kleinen GTPasen und kinesinvermittelten Mechanismen gesteuert werden und Organellenbeweglichkeit sowie zelluläre Homöostase koordinieren. Eine Fehlregulation der Lysosomenpositionierung und des intrazellulären Transports ist in der Neurobiologie breit relevant und spielt auch in experimentellen Modellen von Neurodegeneration und Entzündung eine Rolle, in denen veränderter autophagischer Flux und gestörter Organellentransport häufige Phänotypen sind.

Das LOH12CR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Borcs5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Borcs5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Borcs5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LOH12CR1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Borcs5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LOH12CR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Borcs5-Exone abzielen, die für die LOH12CR1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Borcs5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LOH12CR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LOH12CR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Borcs5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LOH12CR1 HDR-Plasmid (m) und LOH12CR1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Borcs5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Borcs5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.