Plasmide CRISPR d'Activation (h) LNX4: sc-412056-ACT

Le gène humain **PDZRN4** code **LNX4**, une ligase E3 ubiquitine de type RING contenant des domaines PDZ, impliquée dans la régulation, dépendante de l’ubiquitine, du renouvellement des protéines et dans l’organisation des complexes de signalisation. Par ses interactions médiées par les domaines PDZ, LNX4 est supposée influencer le trafic et la stabilité des récepteurs et des protéines d’échafaudage, modulant ainsi des voies en aval qui gouvernent la polarité cellulaire, l’adhérence et la différenciation. En tant que composante du réseau plus large de la famille LNX, **PDZRN4** est pertinent pour l’étude de la protéostasie et du remodelage de la transduction du signal qui accompagnent les réponses au stress cellulaire et la transformation oncogénique. Des altérations d’expression ou des programmes d’ubiquitination dérégulés impliquant des complexes associés à PDZRN4 ont été explorés dans des contextes de biologie tumorale et de neurobiologie, ce qui étaye son intérêt en tant que cible mécanistique de recherche.

LNX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDZRN4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LNX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDZRN4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDZRN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LNX4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDZRN4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LNX4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LNX4 dans les cellules tumorales présentant une expression de PDZRN4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.