LMX1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402945

Übersicht

LMX1B kodiert einen LIM-Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung die Festlegung von Zellschicksalen und die Gewebemusterbildung reguliert und dabei besonders für die dorsale Gliedmaßenidentität, die Podocyten-Differenzierung und neuronale Subtyp-Programme wichtig ist. Es steuert die Genexpression, indem es LIM-Domänen-Interaktionen mit transkriptionellen Koregulatoren und die DNA-Bindung über die Homeodomäne koordiniert, und beeinflusst so Morphogenese, Organisation der extrazellulären Matrix und die Zytoskelettarchitektur. In der Nierenbiologie trägt LMX1B zur Integrität der glomerulären Filtrationsbarriere bei, indem es Podocyten-Gen-Netzwerke moduliert, und ist damit an Signalwegen beteiligt, die die Struktur der Schlitzmembran und die Aktin-Dynamik steuern. Genetische Störungen von LMX1B sind mit dem Nagel-Patella-Syndrom und verwandten renalen und skelettalen Phänotypen assoziiert, was LMX1B zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung transkriptioneller Regulation in Entwicklung und Organogenese macht.

Das LMX1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LMX1B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LMX1B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LMX1B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LMX1B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LMX1B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LMX1B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LMX1B-Exone abzielen, die für die LMX1B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LMX1B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LMX1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LMX1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LMX1B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LMX1B HDR-Plasmid (h) und LMX1B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LMX1B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LMX1B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.