LMP7 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421450-LAC

Das Mausgen *Psmb8* kodiert LMP7 (β5i), eine durch Interferon-γ induzierbare katalytische Untereinheit des Immunoproteasoms, die die konstitutive Untereinheit PSMB5 ersetzt und dadurch die Spaltspezifität des Proteasoms umgestaltet. Indem LMP7 das Repertoire der für die Beladung von MHC-Klasse-I erzeugten Peptide prägt, unterstützt es die Antigenverarbeitung und -präsentation und beeinflusst die von CD8+-T-Zellen gesteuerte Immunüberwachung. Die Aktivität von LMP7 ist in die Funktionen des Ubiquitin-Proteasom-Systems, die Assemblierung des Immunoproteasoms sowie entzündliche Signalprogramme in immunologischen und nicht-immunologischen Geweben eingebunden. Eine veränderte Regulation von PSMB8/LMP7 wurde mit dysregulierter Entzündung und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu Proteostase und Antigenpräsentation macht.

LMP7 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Psmb8-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LMP7 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Psmb8-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LMP7-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Psmb8-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.