Plasmide Double Nickase (h) LMO7: sc-404373-NIC

LMO7 (LIM domain only protein 7) est une protéine d’échafaudage multifonctionnelle qui se localise aux jonctions cellule–cellule, au cytosquelette d’actine et au noyau, où elle contribue à coordonner l’organisation du cytosquelette, la mécanotransduction et des programmes transcriptionnels liés à l’intégrité épithéliale. En interagissant avec des complexes jonctionnels et associés à l’actine, LMO7 participe à la régulation de la forme cellulaire, au remodelage de l’adhérence et à une signalisation sensible au stress qui influence la différenciation et l’architecture tissulaire. Une activité altérée de LMO7 a été associée à des défauts de fonction barrière et de dynamique du cytosquelette, et sa dérégulation est impliquée dans des contextes comprenant les transitions épithélio-mésenchymateuses, des comportements invasifs et le remodelage associé aux tumeurs. Ces caractéristiques font de LMO7 une cible utile pour étudier, dans des modèles cellulaires humains, la signalisation dépendante de l’adhérence, la communication cytosquelette–noyau et l’homéostasie des jonctions.

LMO7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LMO7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LMO7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LMO7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LMO7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.