LMO7 Double Nickase Plasmid (h): sc-404373-NIC

LMO7 (LIM-Domain-only-Protein 7) ist ein multifunktionales Scaffold-Protein, das an Zell-Zell-Kontakten, am Aktinzytoskelett und im Zellkern lokalisiert, wo es zur Koordination der Zytoskelettorganisation, der Mechanotransduktion und von Transkriptionsprogrammen beiträgt, die mit der epithelialen Integrität verknüpft sind. Durch Interaktionen mit Junction- und aktinassoziierten Komplexen trägt LMO7 zur Regulation der Zellform, zum Umbau von Adhäsionen und zu stressresponsiver Signalübertragung bei, die Differenzierung und Gewebearchitektur beeinflusst. Eine veränderte LMO7-Aktivität wurde mit Defekten der Barrierefunktion und der Zytoskelettdynamik in Verbindung gebracht, und seine Dysregulation ist in Kontexten relevant, die epitheliale–mesenchymale Transitionen, invasives Verhalten und tumorassoziiertes Remodeling umfassen. Diese Eigenschaften machen LMO7 zu einem nützlichen Ziel, um adhäsionsabhängige Signalwege, die Kommunikation zwischen Zytoskelett und Zellkern sowie die Homöostase von Zellkontakten in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

LMO7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LMO7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LMO7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LMO7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LMO7-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.