LKLF/KLF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400918

Übersicht

KLF2 (auch als LKLF bekannt) kodiert einen Krüppel‑ähnlichen Zinkfinger‑Transkriptionsfaktor, der zur Aufrechterhaltung der Homöostase von Endothel‑ und Immunzellen beiträgt, indem er scherkräfte‑responsive Genprogramme koordiniert. Im vaskulären Endothel verknüpft KLF2 die Mechanotransduktion mit der transkriptionellen Kontrolle antiinflammatorischer, antithrombotischer und barriere‑stabilisierender Signalwege, einschließlich der Modulation der Stickstoffmonoxid‑Signalgebung und der Expression von Adhäsionsmolekülen. In hämatopoetischen Zelllinien beeinflusst KLF2 die Quieszenz, den Trafficking‑Prozess und die Differenzierung von T‑Zellen über die Regulation von Chemokinrezeptoren und aktivierungsassoziierten transkriptionellen Netzwerken. Eine fehlregulierte KLF2‑Aktivität wird mit vaskulärer Inflammation und atherosklerosebezogenen Prozessen in Verbindung gebracht; zudem wurde eine veränderte Expression in zahlreichen Kontexten von Krebs und Immunfehlregulation beschrieben, was seine Nutzung als funktioneller Knoten in Studien zur Aufschlüsselung von Signalwegen unterstützt.

Das LKLF/KLF2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KLF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KLF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KLF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LKLF/KLF2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KLF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LKLF/KLF2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KLF2-Exone abzielen, die für die LKLF/KLF2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KLF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LKLF/KLF2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LKLF/KLF2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KLF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LKLF/KLF2 HDR-Plasmid (h) und LKLF/KLF2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KLF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KLF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.