Partículas Lentivirales de Activación (r) LKB1: sc-437297-LAC

LKB1 (también conocida como STK11) es una quinasa de serina/treonina que actúa como regulador central del metabolismo y de la polaridad en células de mamífero. Al fosforilar y activar quinasas de la familia AMPK, LKB1 coordina las respuestas al estrés energético, la homeostasis mitocondrial, la autofagia y los puntos de control del ciclo celular, conectando la detección de nutrientes con el control del crecimiento a través de vías que se intersectan con la señalización de mTOR. LKB1 también contribuye a la polaridad epitelial y a la organización del citoesqueleto, influyendo en la migración y la arquitectura tisular. La alteración de la actividad de LKB1 se estudia ampliamente en biología del cáncer y en la disrregulación metabólica, donde una señalización energética modificada y la pérdida del control asociado a la polaridad pueden favorecer una proliferación e invasión aberrantes.

Las partículas de activación lentiviral LKB1 (r) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LKB1 (r) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LKB1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.