LIV-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403294-ACT

SLC39A6 kodiert LIV-1 (ZIP6), einen Zinktransporter der Plasmamembran, der den zellulären Zinkimport reguliert und zur Aufrechterhaltung der Metallhomöostase beiträgt. Die LIV-1‑abhängige Zinksignalgebung beeinflusst Signalwege, die Proliferation, Differenzierung und Motilität steuern, darunter EMT‑assoziierte Programme sowie nachgeschaltete Kinase- und transkriptionelle Netzwerke. Eine veränderte SLC39A6-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und steht mit Änderungen invasiver Phänotypen sowie hormonresponsiver Signalgebung in Zusammenhang, was SLC39A6 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung metallregulierter Zellzustandsübergänge macht. In humanen Zellmodellen liefert LIV-1 einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie die Zinkverfügbarkeit transkriptionelle Schaltkreise und stressadaptive Antworten umformt.

LIV-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC39A6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LIV-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC39A6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC39A6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LIV-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC39A6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LIV-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LIV-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC39A6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.