Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO LIS1 (m): sc-422102
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- LIS1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique LIS1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LIS1 Antibody (H-7): sc-374586
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO LIS1 (m) | sc-422102 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Pafah1b1 code pour LIS1, une protéine régulatrice se liant à la dynéine, qui contrôle le transport dépendant des microtubules, le positionnement du centrosome et l’organisation du fuseau mitotique. Dans les cellules de souris, LIS1 soutient la prolifération des progéniteurs neuronaux et la migration neuronale en modulant la processivité du complexe dynéine–dynactine cytoplasmique et en couplant le déplacement des cargos au réseau de microtubules. Ces fonctions s’intègrent à des voies de remodelage du cytosquelette et de progression du cycle cellulaire qui façonnent l’architecture des tissus au cours du développement. La perturbation des processus associés à LIS1 est liée à des phénotypes de neurodéveloppement caractérisés par une stratification corticale anormale et un positionnement neuronal altéré.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LIS1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pafah1b1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pafah1b1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pafah1b1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LIS1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pafah1b1 pour l'étude de la signalisation de LIS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Pafah1b1 essentiels à la fonction de LIS1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pafah1b1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le LIS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LIS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pafah1b1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le LIS1 plasmide HDR (m) et le LIS1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pafah1b1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pafah1b1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.