Lingo-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414778-ACT

Humanes **LINGO2** kodiert **Lingo-2**, ein Single-Pass-Transmembranprotein mit leucinreichen Repeats sowie Ig-ähnlicher Domäne, das an der Regulation der Zell-Zell-Signalübertragung an der Plasmamembran beteiligt ist. Lingo-2 wurde im Kontext der neuronalen Entwicklung und synaptischer Prozesse untersucht, wobei Proteine der LINGO-Familie die Axonleitung, das Neuritenauswachsen und den Zusammenbau von Rezeptorkomplexen beeinflussen können. Eine veränderte LINGO2-Expression wurde in genetischen und transkriptomischen Studien mit neurologischen Merkmalen und Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Untersuchung von Signalprogrammen unterstreicht, die neuronale Konnektivität und zelluläre Differenzierung prägen. Als membranassoziierter Modulator bietet Lingo-2 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um Veränderungen auf Signalweg-Ebene über nachgeschaltete transkriptionelle Antworten und Phospho-Signaling-Readouts zu untersuchen.

Lingo-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LINGO2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Lingo-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LINGO2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LINGO2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Lingo-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LINGO2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Lingo-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Lingo-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LINGO2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.