Lingo-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404453

Übersicht

LINGO1 kodiert Lingo-1, ein im ZNS angereichertes, leucinreiches Transmembranprotein mit Wiederholungs- und Immunglobulin-Domänen, das als Bestandteil von Rezeptorkomplexen wirkt, die neuronales Wachstum und Myelinisierung regulieren. Lingo-1 interagiert mit der Nogo-Rezeptor-Signalisierung und verwandten Signalwegen, um Axonführung, Neuritenauswuchs, Oligodendrozytendifferenzierung und zytoskelettales Remodeling zu modulieren. Über seine Effekte auf die Neuron-Glia-Kommunikation und inhibitorische Signale im Nervensystem wurde LINGO1 im Zusammenhang mit Demyelinisierung, ausbleibender axonaler Regeneration und neurodegenerationsassoziierten Prozessen untersucht. Eine veränderte LINGO1-Expression oder -Signalübertragung wurde in experimentellen Modellen zudem hinsichtlich möglicher Auswirkungen auf synaptische Plastizität und neuroinflammatorische Antworten untersucht.

Das Lingo-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LINGO1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LINGO1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LINGO1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Lingo-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LINGO1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Lingo-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LINGO1-Exone abzielen, die für die Lingo-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LINGO1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Lingo-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Lingo-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LINGO1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Lingo-1 HDR-Plasmid (h) und Lingo-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LINGO1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LINGO1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.