LIMP II Lentiviral Activation Particles (h): sc-402532-LAC

SCARB2 kodiert das lysosomale integrale Membranprotein 2 (LIMP II), ein multipassiges Membranglykoprotein, das in späten Endosomen und Lysosomen angereichert ist und den endolysosomalen Transport sowie die Homöostase der Lysosomen unterstützt. LIMP II fungiert als zentraler Rezeptor für die Lieferung der β‑Glukozerebrosidase (GCase) in Lysosomen und verknüpft die SCARB2‑Funktion damit mit dem Sphingolipidstoffwechsel und der Proteostase innerhalb des Autophagie‑Lysosom‑Signalwegs. Über seine Rollen in der Membranorganisation und im Frachttransport beeinflusst SCARB2 Prozesse wie Endozytose, Sortierung lysosomaler Enzyme und den Abbau von Makromolekülen. Eine veränderte SCARB2/LIMP‑II‑Aktivität wurde mit lysosomalen Speicherphänotypen und zellulärem Stress im Zusammenhang mit Neurodegeneration in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zu Lysosomenfehlfunktionen und Lipidkatabolismus macht.

LIMP II Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SCARB2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LIMP II Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SCARB2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LIMP II-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SCARB2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.