Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Limd1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424343
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Limd1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Limd1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Limd1 Anticuerpo (H-4): sc-271448
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Limd1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424343 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El dominio LIM que contiene 1 (Limd1) es una proteína de andamiaje que se localiza en las adhesiones focales y en las uniones célula–célula, coordinando interacciones proteína–proteína que determinan la organización del citoesqueleto y la mecanotransducción. Limd1 participa en vías que regulan la adhesión celular, la migración y el control del crecimiento, y se ha relacionado con la regulación de la señalización Hippo/YAP mediante interacciones que influyen en la actividad de LATS y en la localización de YAP/TAZ. En sistemas murinos, Limd1 es útil para estudiar la homeostasis tisular y programas del desarrollo en los que la señalización dependiente de la adhesión es crítica. La desregulación de las redes asociadas a LIMD1 es relevante para la biología de los supresores tumorales y para fenotipos asociados a la metástasis, incluidos cambios en la invasión y procesos tipo transición epitelio–mesénquima.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Limd1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Limd1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Limd1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Limd1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Limd1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Limd1 para la investigación de la señalización de Limd1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Limd1 críticos para la función de Limd1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Limd1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Limd1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Limd1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Limd1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Limd1 (m) y el plásmido HDR Limd1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Limd1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Limd1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.