LIGHT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424539

Übersicht

Mouse Tnfsf14 kodiert LIGHT (TNFSF14), ein Zytokin der TNF-Superfamilie, das als membranständiger und löslicher Ligand für HVEM (TNFRSF14) und LTβR fungiert und die bidirektionale Signalübertragung zwischen Immun- und Stromakompartiment koordiniert. Die Bindung von LIGHT aktiviert NF-κB- und MAPK-Signalwege, um die Kostimulation von T‑Zellen, die Funktion dendritischer Zellen und die Organisation lymphatischen Gewebes zu modulieren, mit nachgeschalteten Effekten auf die Zytokinproduktion und den Leukozytentransport. Eine fehlregulierte LIGHT-Signalgebung wurde mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen sowie mit Tumor–Immun-Interaktionen in Verbindung gebracht, was sie zu einem nützlichen Ansatzpunkt macht, um Immunregulation und Gewebeentzündung in Mausmodellen zu untersuchen. Darüber hinaus trägt Tnfsf14 über LTβR-abhängige Programme zu Barriere- und Gefäßreaktionen bei, die lokale Mikroumgebungen prägen.

Das LIGHT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnfsf14-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnfsf14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnfsf14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LIGHT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnfsf14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LIGHT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnfsf14-Exone abzielen, die für die LIGHT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnfsf14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LIGHT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LIGHT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnfsf14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LIGHT HDR-Plasmid (m) und LIGHT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnfsf14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnfsf14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.