Plasmide Double Nickase (h) LI-cadherin: sc-401229-NIC

CDH17 code la LI-cadhérine, une molécule d’adhésion cellule–cellule dépendante du calcium, enrichie dans l’intestin, appartenant à la superfamille des cadhérines, qui contribue à la cohésion et à la polarité épithéliales. Contrairement aux cadhérines classiques, la LI-cadhérine présente une architecture extracellulaire distincte et peut influencer l’organisation des jonctions, la fonction barrière et les programmes de différenciation des épithéliums gastro-intestinaux. Les dynamiques d’adhésion associées à CDH17 interagissent avec des voies qui régissent l’architecture et la motilité épithéliales, notamment via un dialogue avec le remodelage du cytosquelette et des états transcriptionnels régulés par Wnt/β-caténine. Une expression dérégulée de la LI-cadhérine a été rapportée dans plusieurs pathologies gastro-intestinales et elle est fréquemment étudiée comme marqueur de lignée épithéliale et d’altération de l’organisation tissulaire en biologie des cancers.

LI-cadherin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDH17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDH17. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDH17. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDH17.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.