Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LI-cadherin Double Nickase Plasmid (h): sc-401229-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LI-cadherin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LI-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h) und LI-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDH17 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LI-cadherin: sc-393533
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LI-cadherin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401229-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LI-cadherin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401229-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDH17 kodiert LI‑Cadherin, ein im Darm stark exprimiertes, calciumabhängiges Zell‑Zell‑Adhäsionsmolekül aus der Cadherin‑Superfamilie, das den epithelialen Zusammenhalt und die Polarität unterstützt. Im Gegensatz zu klassischen Cadherinen besitzt LI‑Cadherin eine eigenständige extrazelluläre Architektur und kann die Organisation von Zellkontakten, die Barrierefunktion sowie Differenzierungsprogramme in gastrointestinalen Epithelien beeinflussen. Die von CDH17 abhängige Adhäsionsdynamik greift in Signalwege ein, die die epitheliale Architektur und Motilität steuern, einschließlich Wechselwirkungen mit der Umgestaltung des Zytoskeletts und durch Wnt/β‑Catenin regulierten transkriptionellen Zuständen. Eine fehlregulierte LI‑Cadherin‑Expression wurde bei mehreren gastrointestinalen Pathologien beschrieben und wird in der Krebsbiologie häufig als Marker der epithelialen Linienzugehörigkeit und veränderter Gewebeorganisation untersucht.
LI-cadherin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDH17-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDH17 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDH17-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDH17-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.