LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401229

Übersicht

CDH17 kodiert LI-Cadherin, ein nichtklassisches Cadherin, das im intestinalen Epithel stark angereichert ist, calciumabhängige Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und zur epithelialen Polarität sowie zur Barrierefunktion beiträgt. Im Gegensatz zu klassischen Cadherinen fehlt LI-Cadherin die kanonische Catenin-Bindedomäne, was auf unterschiedliche Mechanismen der Kontrolle von Junction-Organisation, Gewebearchitektur und Zellselektion hinweist. Veränderungen in Expression und Lokalisation von CDH17 werden häufig im Zusammenhang mit gastrointestinalem epithelialem Remodeling sowie tumorassoziierten Veränderungen von Adhäsion, Invasion und Differenzierungsprogrammen untersucht. Als linienassoziiertes Adhäsionsmolekül wird LI-Cadherin zudem genutzt, um zu erforschen, wie membranständige Adhäsionsrezeptoren mit der Regulation des Zytoskeletts, Kontaktinhibition und Signalen aus der Mikroumgebung zusammenwirken.

Das LI-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDH17-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDH17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDH17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LI-cadherin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDH17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LI-cadherin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDH17-Exone abzielen, die für die LI-cadherin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDH17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LI-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LI-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDH17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LI-cadherin HDR-Plasmid (h) und LI-cadherin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDH17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDH17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.