Plásmido CRISPR de Activación (h) LHX9: sc-403360-ACT

LHX9 (homeobox LIM 9) codifica un factor de transcripción con dominio LIM que regula decisiones sobre el destino celular durante el desarrollo embrionario al controlar programas de expresión génica específicos de cada linaje. En la biología humana, la actividad de LHX9 se asocia con procesos de patrón y diferenciación en el sistema nervioso en desarrollo y en los tejidos gonadales, donde se requiere un control transcripcional temporal preciso. Como regulador de unión al ADN, LHX9 interactúa con la cromatina y con redes transcripcionales que moldean las vías del desarrollo, y su expresión alterada se ha investigado en contextos de diferenciación desregulada y estados transcripcionales oncogénicos. Estas propiedades hacen de LHX9 una diana útil para estudiar circuitos de regulación génica, factores de transcripción del desarrollo y la modulación del fenotipo impulsada por cambios en la transcripción endógena.

LHX9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LHX9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LHX9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LHX9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LHX9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LHX9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LHX9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LHX9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LHX9 en células tumorales con expresión de LHX9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.