LHX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421428

Übersicht

Lhx5 kodiert den LIM-Homeobox-Transkriptionsfaktor LHX5, einen nukleären, DNA-bindenden Regulator, der für Musterbildung und Differenzierung des sich entwickelnden zentralen Nervensystems erforderlich ist. In der Maus trägt LHX5 zur regionalen Identität und zur Festlegung neuronaler Zelllinien bei – über LIM-Domänen-abhängige Transkriptionsprogramme, die mit umfassenderen Homeobox-Netzwerken zusammenwirken, welche Neurogenese und Axonführung steuern. Eine veränderte LHX5-Aktivität ist mit Defekten in der Entwicklung von Vorderhirn und Hippocampus und den daraus resultierenden neuroentwicklungsbedingten Phänotypen assoziiert, was LHX5 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien der Bildung neuronaler Schaltkreise macht. Als Transkriptionsregulator beeinflusst LHX5 nachgeschaltete Genexpressionskaskaden, die Schicksalsentscheidungen von Zellen und Reifungszustände in neuralen Vorläuferzellen und sich differenzierenden Neuronen prägen.

Das LHX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lhx5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lhx5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lhx5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LHX5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lhx5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LHX5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lhx5-Exone abzielen, die für die LHX5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lhx5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LHX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LHX5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lhx5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LHX5 HDR-Plasmid (m) und LHX5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lhx5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lhx5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.