Partículas Lentivirales de Activación (m) LGR5: sc-420320-LAC

El gen Lgr5 del ratón codifica LGR5, un receptor acoplado a proteína G con repeticiones ricas en leucina, conocido sobre todo como marcador y regulador funcional de poblaciones de células madre adultas en múltiples tejidos epiteliales. LGR5 potencia la señalización canónica Wnt/β-catenina mediante la unión de alta afinidad a ligandos R-spondina, estabilizando los complejos receptores Frizzled/LRP y amplificando programas transcripcionales que gobiernan la autorrenovación, la proliferación y el compromiso de linaje. Las células que expresan Lgr5 contribuyen a la homeostasis y la regeneración tisular, y la actividad alterada del eje LGR5/Wnt se estudia ampliamente en contextos de “stemness” desregulada, remodelación epitelial y biología tumoral. Como resultado, Lgr5 sirve como un punto de entrada accesible para investigar la dinámica de las células madre, la señalización del nicho y las redes transcripcionales impulsadas por Wnt en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral LGR5 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Lgr5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LGR5 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Lgr5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LGR5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Lgr5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.