Plasmide CRISPR/Cas9 KO LENG4 (h): sc-408536

Présentation

MBOAT7 code une O‑acyltransférase membranaire liée au réticulum endoplasmique, qui remodèle le phosphatidylinositol en y incorporant de l’arachidonoyl‑CoA, façonnant ainsi la composition des phosphoinositides cellulaires et la signalisation en aval. En agissant sur l’homéostasie des lipides membranaires, MBOAT7 influence des nœuds de signalisation dérivés du PI qui régulent le trafic vésiculaire, la dynamique du cytosquelette et les réponses inflammatoires. Des altérations de l’activité ou de l’expression de MBOAT7 ont été associées à des phénotypes métaboliques et hépatiques, notamment une susceptibilité à la dérégulation lipidique et aux lésions hépatiques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études d’immunométabolisme et de signalisation du stress. LENG4 (leukocyte receptor cluster member 4) est une protéine humaine dont les rôles dans des contextes liés à l’immunité commencent à émerger, et qui permet d’explorer au niveau des voies de signalisation le dialogue entre signalisation lipidique et immunité dans des modèles cellulaires pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LENG4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MBOAT7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MBOAT7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MBOAT7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LENG4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MBOAT7 pour l'étude de la signalisation de LENG4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MBOAT7 essentiels à la fonction de LENG4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MBOAT7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LENG4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LENG4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MBOAT7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LENG4 plasmide HDR (h) et le LENG4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MBOAT7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MBOAT7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.