LENG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408536

Übersicht

MBOAT7 kodiert eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte, membrangebundene O‑Acyltransferase, die Phosphatidylinositol durch Einbau von Arachidonoyl‑CoA umgestaltet und dadurch die zelluläre Phosphoinositid-Zusammensetzung sowie nachgeschaltete Signalwege prägt. Über seine Effekte auf die Homöostase von Membranlipiden beeinflusst MBOAT7 PI‑abgeleitete Signal-Knotenpunkte, die vesikulären Transport, Zytoskelettdynamik und entzündliche Antworten regulieren. Eine veränderte MBOAT7‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit metabolischen und hepatischen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter eine erhöhte Anfälligkeit für Lipidfehlregulation und Leberschädigung, was MBOAT7 für Studien zu Immunmetabolismus und Stresssignalgebung relevant macht. LENG4 (Leukocyte Receptor Cluster Member 4) ist ein menschliches Protein mit sich abzeichnenden Rollen in immunassoziierten Kontexten und eignet sich daher für eine pathwayspezifische Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen Lipidsignalen und Immunantworten in geeigneten Zellmodellen.

Das LENG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MBOAT7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MBOAT7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MBOAT7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LENG4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MBOAT7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LENG4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MBOAT7-Exone abzielen, die für die LENG4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MBOAT7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LENG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LENG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MBOAT7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LENG4 HDR-Plasmid (h) und LENG4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MBOAT7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MBOAT7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.