Lck Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421397

Descripción general

Lck (quinasa de tirosina proteica específica de linfocitos) es una quinasa de la familia Src que inicia la señalización del receptor de células T (TCR) al fosforilar los motivos ITAM de CD3 y promover el reclutamiento y la activación de ZAP70, lo que conduce al ensamblaje posterior del signalosoma de LAT/SLP-76. En las células inmunitarias de ratón, Lck regula eventos de señalización proximales que acoplan el reconocimiento del antígeno con el flujo de calcio, la activación de MAPK y programas transcripcionales controlados por NFAT, NF-κB y AP-1, moldeando el desarrollo de los timocitos y la activación de las células T periféricas. La actividad de Lck se integra con la señalización de los correceptores (CD4/CD8) y se modula mediante un cambio dependiente de fosforilación entre conformaciones activas e inactivas, lo que la convierte en un elemento central de los umbrales de señalización en los linfocitos. Las vías dependientes de Lck desreguladas se utilizan con frecuencia como modelos de activación inmune alterada, linfoproliferación y señalización aberrante de quinasas de tirosina en contextos hematopoyéticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Lck (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lck en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lck junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lck tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Lck.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lck para la investigación de la señalización de Lck, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lck críticos para la función de Lck
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lck para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Lck CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Lck CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lck. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Lck (m) y el plásmido HDR Lck (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lck para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lck definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.