Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420811

Übersicht

Hcls1 kodiert bei der Maus das hämatopoetische zellspezifische Lyn-Substrat 1 (Lck BP-1), ein Adapterprotein, das in Immunzelllinien angereichert ist und die Signalübertragung von Antigenrezeptoren mit der Umgestaltung des Zytoskeletts koppelt. Über phosphorylierungsabhängige Interaktionen mit Src-Familienkinasen und Aktin-regulatorischen Komplexen trägt Lck BP-1 zu immundrezeptorvermitteltem Kalziumfluss, MAPK-Aktivierung sowie dynamischen Veränderungen von Zellform und Motilität bei. Dieser Signal-Knotenpunkt beeinflusst die Aktivierung, Adhäsion und das Trafficking von Lymphozyten und verbindet rezeptorproximale Ereignisse mit nachgeschalteten transkriptionellen Antworten. Eine Fehlregulation Hcls1-assoziierter Signalwege ist relevant für Studien zu inflammatorischer Signalgebung, aberranter Aktivierung von Immunzellen und zur Biologie hämatopoetischer Zellen.

Das Lck BP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hcls1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hcls1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hcls1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Lck BP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hcls1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Lck BP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hcls1-Exone abzielen, die für die Lck BP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hcls1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Lck BP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Lck BP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hcls1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Lck BP-1 HDR-Plasmid (m) und Lck BP-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hcls1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hcls1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.