LBP-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404224-ACT

TFCP2L1 kodiert den Transkriptionsfaktor LBP-9, ein DNA-bindendes Protein der CP2-Familie, das Genexpressionsprogramme reguliert, die mit Zellidentität, epithelialer Differenzierung und der transkriptionellen Steuerung während der Entwicklung verknüpft sind. LBP-9 wird mit der Aufrechterhaltung stammzellähnlicher Zustände und der Koordination signalantwortlicher Transkription in Verbindung gebracht und greift dabei in Signalwege ein, die Proliferation und Linienfestlegung beeinflussen. Eine fehlregulierte TFCP2L1-Aktivität und veränderte nachgeschaltete Transkriptionsnetzwerke wurden in mehreren Gewebekontexten mit onkogenen Phänotypen und aberranter Differenzierung assoziiert. Als nuklearer Regulator bietet LBP-9 einen nützlichen Ansatzpunkt, um die chromatinabhängige Kontrolle von Gennetzwerken zu untersuchen, die für Transformation und zelluläre Plastizität relevant sind.

LBP-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TFCP2L1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LBP-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TFCP2L1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TFCP2L1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LBP-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TFCP2L1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LBP-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LBP-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TFCP2L1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.