Latrophilin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408830-ACT

ADGRL1 kodiert Latrophilin-1, einen Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der im Nervensystem stark angereichert ist und extrazelluläre Zelladhäsionssignale mit intrazellulärer Signalübertragung verknüpft. Über Interaktionen mit Teneurinen, FLRT‑Proteinen und intrazellulären G‑Protein‑Signalwegen trägt Latrophilin-1 zur Synapsenbildung, zum Neuritenauswachsen und zur aktivitätsabhängigen Verfeinerung neuronaler Schaltkreise bei. Zu den nachgeschalteten Effekten zählen die Modulation von cAMP‑ und Rho‑Familien‑Signalen, Zytoskelett‑Remodelling sowie Prozesse des Vesikeltransports, die die neuronale Konnektivität prägen. Eine Fehlregulation von ADGRL1 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und einer veränderten synaptischen Organisation in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien der Gehirnfunktion und krankheitsassoziierter Signalwege unterstreicht.

Latrophilin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADGRL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Latrophilin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADGRL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADGRL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Latrophilin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADGRL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Latrophilin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Latrophilin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADGRL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.