Plasmide Double Nickase (h) LAPTM4B: sc-408254-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LAPTM4B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LAPTM4B Double Nickase (h) et le plasmide LAPTM4B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LAPTM4B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LAPTM4B | sc-408254-NIC | 20 µg | $410.00 |
LAPTM4B (lysosomal protein transmembrane 4 beta) est une protéine membranaire multipasse des lysosomes/endosomes qui régule le trafic intracellulaire, la signalisation associée aux lysosomes et la dynamique membranaire. Elle participe à des processus de transport endolysosomal qui influencent le renouvellement des récepteurs et des voies en aval telles que PI3K/AKT, ainsi que l’homéostasie autophagie–lysosome, avec un impact sur les réponses au stress cellulaire et la détection des nutriments. Une expression altérée de LAPTM4B a été associée à des modifications de la prolifération, de l’invasion et de la gestion des médicaments dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les mécanismes centrés sur les lysosomes dans des modèles de maladies. Dans les cellules humaines, LAPTM4B est également étudiée pour ses rôles dans l’organisation vésiculaire et la modulation des sorties de signalisation provenant de récepteurs internalisés.
LAPTM4B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAPTM4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAPTM4B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAPTM4B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAPTM4B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.