Plasmide Double Nickase (h) LAP2: sc-403613-NIC

Le gène humain **TMPO** code la polypeptide 2 associée à la lamina (**LAP2**), une protéine de la membrane nucléaire interne qui se lie aux lamines et à la chromatine afin d’organiser l’architecture nucléaire et de réguler la stabilité du génome. Les différentes isoformes de LAP2 contribuent à l’assemblage de l’enveloppe nucléaire, à l’ancrage lamina–chromatine et à la reformation du noyau couplée au cycle cellulaire après la mitose, en influençant les programmes transcriptionnels et le calendrier de réplication de l’ADN. Par ces rôles structurels et régulateurs, TMPO s’inscrit dans des voies qui contrôlent l’organisation de la chromatine, la mécano-transduction vers le noyau et le maintien de l’intégrité nucléaire. Des interactions anormales entre l’enveloppe nucléaire et la chromatine impliquant TMPO/LAP2 ont été associées à une morphologie nucléaire atypique et ont été étudiées dans le contexte de mécanismes de maladies prolifératives et dégénératives où la structure nucléaire est perturbée.

LAP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TMPO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TMPO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TMPO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TMPO.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.