Plasmide CRISPR/Cas9 KO LAP2 (h): sc-403613

Présentation

TMPO code la polypeptide 2 associée à la lamine (LAP2), une protéine de la membrane nucléaire interne qui se lie aux lamines et à la chromatine pour organiser la lamina nucléaire et maintenir l’architecture de l’enveloppe nucléaire. Les isoformes de LAP2 contribuent à l’ancrage de l’hétérochromatine périphérique, à la régulation du calendrier de réplication de l’ADN et à la coordination de la réassemblage nucléaire post-mitotique, reliant ainsi TMPO aux voies de contrôle du cycle cellulaire et de stabilité du génome. Par ses interactions avec la lamine A/C et d’autres composants de l’enveloppe, LAP2 influence la mécanotransduction et l’intégrité nucléaire en conditions prolifératives ou de stress. Une expression altérée de TMPO/LAP2 ou un dysfonctionnement de l’enveloppe nucléaire est associé à une morphologie nucléaire aberrante, observée dans le cancer et d’autres troubles impliquant une organisation du génome compromise.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LAP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMPO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMPO, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMPO à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LAP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMPO pour l'étude de la signalisation de LAP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMPO essentiels à la fonction de LAP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMPO pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMPO. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LAP2 plasmide HDR (h) et le LAP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMPO pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMPO définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.