LAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403613

Übersicht

TMPO kodiert das laminaassoziierte Polypeptid 2 (LAP2), ein Protein der inneren Kernmembran, das an Lamina-Proteine und Chromatin bindet, um die Kernlamina zu organisieren und die Architektur der Kernhülle aufrechtzuerhalten. LAP2-Isoformen tragen dazu bei, peripheres Heterochromatin zu verankern, den Zeitpunkt der DNA-Replikation zu regulieren und den Wiederaufbau des Zellkerns nach der Mitose zu koordinieren, wodurch TMPO mit Zellzykluskontrolle und Signalwegen der Genomstabilität verknüpft ist. Über Interaktionen mit Lamin A/C und weiteren Komponenten der Kernhülle beeinflusst LAP2 die Mechanotransduktion und die Integrität des Zellkerns unter proliferativen Bedingungen oder bei Stress. Eine veränderte TMPO/LAP2-Expression oder eine Dysfunktion der Kernhülle wird mit abweichender Kernmorphologie in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit beeinträchtigter Genomorganisation beobachtet wird.

Das LAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMPO-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMPO-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMPO nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LAP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMPO-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LAP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMPO-Exone abzielen, die für die LAP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMPO-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMPO-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LAP2 HDR-Plasmid (h) und LAP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMPO-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMPO-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.