Plasmide CRISPR d'Activation (h) Langerin: sc-401949-ACT

CD207 code la langerine, un récepteur lectine de type C enrichi dans les cellules de Langerhans et des sous-ensembles apparentés de cellules dendritiques, qui intervient dans la reconnaissance des agents pathogènes et la capture d’antigènes au niveau des barrières épithéliales. La langerine se lie à des motifs glucidiques de manière dépendante du Ca²⁺ et médie l’endocytose vers les granules de Birbeck, orientant les programmes de traitement et de présentation de l’antigène qui influencent l’amorçage de l’immunité adaptative. Via une internalisation guidée par lectine et un adressage vers les compartiments endosomaux, elle s’articule avec la détection immunitaire innée et la signalisation inflammatoire, qui modulent la production de cytokines et la polarisation des lymphocytes T. Des altérations de l’expression de CD207/langerine ou de la fonction des cellules de Langerhans sont pertinentes pour l’étude de l’homéostasie immunitaire cutanée, de l’inflammation allergique et des réponses immunitaires de barrière associées aux infections.

Langerin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD207 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Langerin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD207 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD207, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Langerin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD207 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Langerin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Langerin dans les cellules tumorales présentant une expression de CD207 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.