Laminin α-5CRISPR激活质粒(h): sc-401168-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Laminin α-5 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Laminin α-5 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Laminin α-5 CRISPR 激活质粒 (h) 和 Laminin α-5 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 LAMA5 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Laminin α-5: sc-130542，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Laminin α-5CRISPR激活质粒(h) | sc-401168-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Laminin α-5CRISPR激活质粒(h2) | sc-401168-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
LAMA5 编码层粘连蛋白 α-5（laminin α-5），它是层粘连蛋白-511 和层粘连蛋白-521 异源三聚体的核心亚基，这些复合物负责组织基底膜，并调控上皮与内皮细胞的黏附、极性和分化。通过与整合素（integrins）、肌营养不良糖蛋白（dystroglycan）及其他细胞外基质受体相互作用，laminin α-5 参与黏着斑信号传导，并激活 FAK/Src、PI3K–AKT 和 MAPK 等下游通路，从而协同调控细胞迁移与存活。富含 LAMA5 的基质塑造皮肤、肾小球、肺及血管等组织的结构，影响屏障功能与形态发生。laminin α-5 的沉积或信号传导失调与基底膜完整性改变相关，并已在纤维化、炎症性重塑以及肿瘤侵袭微环境等研究情境中受到关注。
Laminin α-5 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LAMA5的表达。
Laminin α-5 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LAMA5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LAMA5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Laminin α-5表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LAMA5位点，并能够研究内源性位点上依赖于Laminin α-5的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LAMA5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Laminin α-5通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。