Lamin B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401873

Übersicht

LMNB2 kodiert Lamin B2, ein essenzielles Intermediärfilamentprotein vom Typ V der nukleären Lamina, das die Architektur der Kernhülle und die Organisation des Chromatins unterstützt. Lamin B2 trägt zur DNA-Replikation, zur transkriptionellen Regulation und zur mitotischen Wiederzusammensetzung des Zellkerns bei und vereint damit strukturelle und regulatorische Funktionen in der Kernmechanik und der Genomstabilität. Als Teil des umfassenderen Lamin-Netzwerks beeinflusst es Prozesse wie die Positionierung von Kernporen und die Verankerung lamina-assoziierter Domänen (LADs), die den epigenetischen Zustand und die zelluläre Differenzierung mitprägen. Eine Fehlregulation von Komponenten der nukleären Lamina, einschließlich LMNB2, steht mit veränderter Kernmorphologie in Zusammenhang und wurde mit neuroentwicklungsbezogenen sowie proliferativen Phänotypen assoziiert, die für die Mechanobiologie und die Forschung zur Genomerhaltung relevant sind.

Das Lamin B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LMNB2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LMNB2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LMNB2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Lamin B2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LMNB2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Lamin B2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LMNB2-Exone abzielen, die für die Lamin B2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LMNB2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Lamin B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Lamin B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LMNB2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Lamin B2 HDR-Plasmid (h) und Lamin B2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LMNB2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LMNB2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.