Plásmido CRISPR de Activación (h) Lamin B2: sc-401873-ACT

LMNB2 codifica la lamina B2, un componente esencial de la lámina nuclear que polimeriza por debajo de la membrana nuclear interna para mantener la forma del núcleo y su estabilidad mecánica. La lamina B2 participa en el anclaje de la cromatina, en la temporización de la replicación del ADN y en el reensamblaje de la envoltura nuclear durante la mitosis, conectando la organización del genoma con la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés. A través de interacciones con dominios asociados a las láminas y con los complejos del poro nuclear, influye en programas transcripcionales y en vías de mantenimiento de la integridad del genoma. La alteración de la función de la familia de las láminas B se asocia con defectos en la arquitectura nuclear, organización anómala de la cromatina y fenotipos relevantes para el envejecimiento prematuro, el neurodesarrollo y la biología de las células cancerosas.

Lamin B2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LMNB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Lamin B2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LMNB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LMNB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Lamin B2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LMNB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Lamin B2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Lamin B2 en células tumorales con expresión de LMNB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.