LAGE-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403565-ACT

CTAG2 codiert LAGE-1, ein Krebs-/Hoden-Antigen mit stark eingeschränkter Expression in normalen adulten Geweben und häufiger Re-Expression in mehreren Tumorarten. LAGE-1 wird mit tumorassoziierten Transkriptionsprogrammen und zellulären Zuständen in Verbindung gebracht, die mit Proliferation und Immunerkennung zusammenhängen, und wird häufig zusammen mit verwandten Antigenen wie Mitgliedern der MAGE-Familie im Kontext von Antigenpräsentation und Tumorimmunbiologie untersucht. Obwohl seine genaue mechanistische Rolle weiterhin nicht vollständig geklärt ist, wird die CTAG2-Expression weithin als Biomarker für Tumorantigenität und Linien-/Zellzustand genutzt und unterstützt Forschung zu epigenetischer Reaktivierung, onkogenem Signaling und immunausweichenden Phänotypen. Eine fehlregulierte CTAG2/LAGE-1-Expression wurde in unterschiedlichen Krebsarten beschrieben, was es für Studien zur Tumorheterogenität und zu antigengetriebenen Selektionsdrücken relevant macht.

LAGE-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTAG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LAGE-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTAG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTAG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LAGE-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTAG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LAGE-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LAGE-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTAG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.