L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416338
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- L-type Ca++ CP α1F Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im L-type Ca++ CP α1F-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: L-type Ca++ CP α1F: sc-517005
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-416338 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CACNA1F kodiert die porenbildende α1F‑Untereinheit eines L‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanals, der in erregbaren Zellen den Ca2+-Einstrom vermittelt und die Membrandepolarisation an intrazelluläre Signalwege koppelt. Die Kanalaktivität prägt calciumabhängige Prozesse wie synaptische Transmission, Neurotransmitterfreisetzung und aktivitätsregulierte Genexpression über Signalwege wie CaM/CaMK und die Calcineurin‑NFAT‑Signalkaskade. In der menschlichen Retina ist die Funktion von CACNA1F besonders wichtig für die Neurotransmission von Photorezeptoren zu Bipolarzellen und die Verarbeitung visueller Signale. Genetische Störungen von CACNA1F wurden mit erblichen Netzhauterkrankungen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Erforschung der Ca2+-Kanalbiologie und von Krankheitsmechanismen unterstreicht.
Das L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CACNA1F-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CACNA1F-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CACNA1F nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-type Ca++ CP α1F-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CACNA1F-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-type Ca++ CP α1F-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CACNA1F-Exone abzielen, die für die L-type Ca++ CP α1F-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CACNA1F-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom L-type Ca++ CP α1F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CACNA1F-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-type Ca++ CP α1F HDR-Plasmid (h) und L-type Ca++ CP α1F HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CACNA1F-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CACNA1F-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.