L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422872

Übersicht

Sell kodiert L‑Selectin (CD62L), einen Leukozyten-Adhäsionsrezeptor, der durch Bindung an periphere Knotenadressine (peripheral node addressins) und andere sulfatierten, sialylierten Glykanliganden das Homing von Lymphozyten sowie das Rolling von Leukozyten an hochendothelialen Venolen vermittelt. In Immunzellen der Maus koordinieren Shedding und intrazelluläres Trafficking von CD62L die Übergänge zwischen naiven, zentralen Gedächtnis- und aktivierten Phänotypen und verknüpfen damit Adhäsionsdynamik mit chemokinvermittelter Migration und Immunüberwachung. SELL‑Signalgebung und die Abspaltung der Ektodomäne greifen in Entzündungskaskaden und endotheliale Aktivierung ein und prägen so die Rekrutierung von Leukozyten bei Gewebeschädigung und Infektion. Eine veränderte, L‑Selectin‑abhängige Zellmigration wird häufig in Modellen für Autoimmunität, chronische Entzündung und Tumorimmunologie untersucht, in denen Zelllokalisation und Priming Krankheitsphänotypen beeinflussen.

Das L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sell-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sell-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sell nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-Selectin/CD62L/SELL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sell-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-Selectin/CD62L/SELL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sell-Exone abzielen, die für die L-Selectin/CD62L/SELL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sell-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sell-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-Selectin/CD62L/SELL HDR-Plasmid (m) und L-Selectin/CD62L/SELL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sell-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sell-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.