L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401984-ACT

SELL kodiert L‑Selectin (CD62L), einen auf Leukozyten exprimierten Adhäsionsrezeptor, der über die Bindung an sialylierte und fukosylierte Liganden das Anheften (Tethering) und Rollen auf dem vaskulären Endothel vermittelt. Diese Interaktion koordiniert das Homing von Lymphozyten in sekundäre lymphatische Organe und reguliert den Leukozytenverkehr während Entzündungen, indem sie mit chemokinvermittelter Inside‑out‑Signalgebung und Zytoskelett‑Remodeling zusammenwirkt, um die Extravasation zu unterstützen. Das Abspalten (Shedding) von L‑Selectin durch Metalloproteasen justiert zusätzlich Zellmigration und Aktivierungszustände und verknüpft so die Dynamik der SELL‑Expression mit der Immunüberwachung. Dysregulierte CD62L‑Spiegel oder veränderte Spaltmuster werden häufig im Kontext entzündlicher Signalwege, Autoimmunität und der Biologie hämatologischer Malignome untersucht, bei denen verändertes Trafficking die Gewebeinfiltration beeinflusst.

L-Selectin/CD62L/SELL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SELL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

L-Selectin/CD62L/SELL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SELL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SELL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen L-Selectin/CD62L/SELL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SELL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von L-Selectin/CD62L/SELL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des L-Selectin/CD62L/SELL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SELL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.