Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-Myc (h): sc-401836

Présentation

MYCL code L-Myc, un facteur de transcription à fermeture éclair leucine de type hélice–boucle–hélice basique (bHLH-LZ) de la famille MYC, qui hétérodimérise avec MAX pour réguler l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II. L-Myc influence la progression du cycle cellulaire, la biogenèse des ribosomes, la reprogrammation métabolique et le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine, en intégrant des signaux au sein des programmes de prolifération et de différenciation. L’activité de MYCL s’inscrit dans la dynamique du réseau MYC/MAX et peut moduler la transcription dépendante d’E2F ainsi que les réponses au stress apoptotique selon le contexte cellulaire. La dérégulation ou l’amplification de MYCL est associée à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans certains types tumoraux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle de la croissance lié à la lignée cellulaire et les circuits de facteurs de transcription.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO L-Myc (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYCL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYCL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYCL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine L-Myc.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYCL pour l'étude de la signalisation de L-Myc, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYCL essentiels à la fonction de L-Myc
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYCL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le L-Myc plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le L-Myc plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYCL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le L-Myc plasmide HDR (h) et le L-Myc (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYCL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYCL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.