KV6.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413962

Übersicht

KCNG4 kodiert die Kv6.3‑Untereinheit, ein elektrisch stummes Mitglied der Familie spannungsabhängiger Kaliumkanäle, das die Membran-Erregbarkeit moduliert, indem es mit Kv2‑Kanal‑α‑Untereinheiten heterotetramere Komplexe bildet. Durch diese modulierende Funktion beeinflusst Kv6.3 die Form des Aktionspotenzials, die Auslöseschwellen und die Repolarisationskinetik und ist damit in die Ionenhomöostase sowie in erregbarkeitsassoziierte Signalprozesse eingebunden. Eine Expression von KCNG4 wurde in erregbaren Geweben beschrieben und ist für Signalwege relevant, die die neuronale und sensorische Signalübertragung sowie das elektrische Verhalten glatter Muskulatur steuern. Eine Fehlregulation von Kaliumkanal‑Modulatoren wird allgemein mit Erregbarkeitsstörungen in Verbindung gebracht, was KCNG4 als Ziel für mechanistische Untersuchungen zur Zusammensetzung und Funktion von Ionenkanälen in krankheitsrelevanten Zellmodellen unterstützt.

Das KV6.3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNG4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNG4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNG4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KV6.3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNG4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KV6.3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNG4-Exone abzielen, die für die KV6.3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNG4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KV6.3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KV6.3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNG4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KV6.3 HDR-Plasmid (h) und KV6.3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNG4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNG4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.