KV4.3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404247-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KV4.3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KV4.3 Double-Nickase-Plasmid (h) und KV4.3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCND3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KV4.3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404247-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KV4.3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche Gen **KCND3** kodiert die spannungsabhängige Kaliumkanal‑Untereinheit **KV4.3**, einen zentralen Vermittler schnell inaktivierender A‑Typ‑K+-Ströme, die die Repolarisation des Aktionspotenzials formen und die Entladungsfrequenz in erregbaren Zellen regulieren. Die Aktivität von KV4.3 ist in Programme der Membranerregbarkeit eingebettet, die Ionenleitfähigkeit mit Ca2+-Signalgebung, synaptischer Transmission und aktivitätsabhängiger Genexpression koppeln. Im Nervensystem trägt KCND3 zum neuronalen Pacemaking und zur dendritischen Signalverarbeitung bei; Varianten wurden mit Erregbarkeitsstörungen in Verbindung gebracht, darunter spinocerebelläre Ataxie sowie kardiale Arrhythmie‑Phänotypen. Diese Eigenschaften machen KCND3 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Mechanismen der elektrischen Signalübertragung, der Kanalbiophysik und von Genotyp‑Phänotyp‑Beziehungen in krankheitsrelevanten zellulären Modellen.
KV4.3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCND3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCND3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCND3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCND3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.