Plasmide CRISPR d'Activation (h) KV4.2: sc-402801-ACT

KCND2 code la sous-unité de canal potassique voltage‑dépendant KV4.2, un médiateur majeur des courants potassiques transitoires rapides de type A (K+) dans les neurones et les cardiomyocytes. En modulant la repolarisation du potentiel d’action, l’adaptation de la fréquence de décharge et les signaux rétro‑propagés, KV4.2 influence l’excitabilité, l’intégration synaptique et la plasticité dépendante de l’activité, avec une régulation par phosphorylation et par des sous‑unités auxiliaires telles que les KChIPs et DPP6/10. Des altérations de l’expression du canal ou de ses propriétés d’ouverture/fermeture (gating) liées à KCND2 ont été associées à des phénotypes neurologiques, notamment l’épilepsie et des troubles du neurodéveloppement, et les dynamiques de repolarisation dépendantes de KV4.2 sont pertinentes pour l’étude de la susceptibilité aux arythmies et de l’électrophysiologie cardiaque. Ces caractéristiques font de KCND2 une cible utile pour explorer la biologie des canaux ioniques, les circuits d’excitabilité et les voies de signalisation qui ajustent la conductance membranaire.

KV4.2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KCND2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KV4.2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KCND2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KCND2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KV4.2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KCND2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KV4.2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KV4.2 dans les cellules tumorales présentant une expression de KCND2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.